ELISA操作常見問題和解決方法

更新時間：2015-09-23

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ELISA操作常見問題和解決方法

ELISA即酶聯免疫吸附實驗，是目前廣泛應用于各種抗原抗體檢測的方法，主要有靈敏度高和特異性強的特點。ELISA操作步驟看似簡單，整個測定過程中卻有諸多影響因素，導致檢測結果可能與實際結果偏差較大。為幫助大家分析實驗中常見問題，我們將常見問題的可能原因和解決方法歸納總結于下表：

問題一：高背景或陰性對照值偏高

可能原因	建議
陰性對照孔被陽性對照或樣品污染	洗滌時，勿將洗液溢出孔外。
洗滌不充分	確保在洗滌時每個孔都充滿了液體，確保將殘余液體從孔中移除。
酶結合物過濃	請檢查酶結合物是否按說明書規定稀釋
孵育溫度過高	檢查孵育箱的溫度是否正確、穩定
底物在使用前曝光	應保存在暗處，避光。
讀板前停留時間過長	加終止液后3分鐘內讀數

問題二：陽性對照值偏低或低吸光度

問題三：邊緣效應

問題四：標準曲線不佳

可能原因	建議
倍比稀釋標準品時未混勻	稀釋標準品的每一步均需混勻
過早稀釋	標準品在快要使用時稀釋
加入的體積不正確	使用校準過的移液器，快速、等量的將標準品分配到各個微孔中

問題五：標準曲標準曲線良好，但樣本無檢測信號

可能原因	建議
樣本中無檢測物或檢測物含量極低	設置內參，重新實驗
樣本中其他物質影響/掩蓋檢測	作適當稀釋，降低其他物質的干擾，或作系列稀釋，檢測回收率。
樣本中檢測物濃度過高，Hook效應導致假低值	適當倍數稀釋樣本，檢測物濃度盡量在試劑盒檢測范圍內。

問題六：重復性較差